本生帶您了解、胎牛血清凍存和融化的注意事項
 

　　不同于其它常用的實驗方法，細胞培養(yǎng)是一個動態(tài)的過程。胎牛血清作為細胞培養(yǎng)一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長產生極大的影響。作為胎牛血清的主要供應商之一，我們經常收到焦急的客戶來電，稱血清出現(xiàn)了什么問題。小編將針對血清如何儲存、融化、為何出現(xiàn)沉淀以及如何減少沉淀做出詳細說明，旨在幫助客戶解決血清出現(xiàn)的問題。BUNSEN本生胎牛血清

　　血清沉淀：

　　1 血清非人工產品，沉淀出來系自然現(xiàn)象

　　● 纖維蛋白原(主要)

　　● 鹽析出。如磷酸鈣等

　　● 膽固醇和脂肪酸

　　● 蛋白析出

　　2 沉淀在下列情況下還會增加:

　　● 血清熱滅活

　　● 37℃培養(yǎng)(常常由此引發(fā)歧異)

　　● 反復凍融

　　● 溶解過程中沒有搖勻

　　● 伽馬射線照射

　　● 長期存放在2-8°C

　　● 血清加入到 RPMI1640 中時，沉淀往往會發(fā)生或增加

　　● pH升高時，沉淀會增加

　　● 在培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，因為培養(yǎng)基的蒸發(fā)也會導致沉淀的增加

　　3沉淀不會影響其對細胞的促生長作用

　　● 技術人員對此問題有過深入研究證明

　　● 請注意一個例外：沉淀影響巨噬細胞的培養(yǎng)

　　4 這種現(xiàn)象發(fā)生在所有的血清中

　　● l網站上說“G”品牌的胎牛血清沒有預老化，如果存放在2-8℃，血清中的各種蛋白或酯類有可能會凝聚析出，出現(xiàn)沉淀或混濁。這種不會影響血清對細胞的促生長作用。我們建議把血清存放在-20℃，并避免反復凍融。

　　● 品牌胎牛血清說明書中說:“在熔化過程中混濁多絮狀沉淀，這種現(xiàn)象對多數(shù)血清來說是正常的，并不影響其使用質量。但它影響血清的外觀，影響瓶與瓶之間的一致性。BUNSEN本生胎牛血清

　　5 血清并沒有被污染

　　● 檢測血清是否被污染方法是將血清接種到血酯板上，培養(yǎng)后看是否有菌落形成.

　　● 在1000x顯微鏡下，有經驗的微生物學家通過觀察有無格蘭仕染色的細菌，也可以判斷血清是否被污染

　　如何去除血清中的沉淀?

　　● 如想去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)液中。

　　● 不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為可能阻塞濾膜。

　　血清溶解建議-如何減少沉淀

　　● 將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱12-24小時左右使之浴解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

　　● 切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來的血清直接放在水浴中，無論室溫的水或者37℃的水，因為在水浴中血清迅速熔化，很大的溫差(-20℃到37℃，溫差為57℃)極其容易造成血清產生沉淀。

　　● 直接放65℃水浴中更是極其殘忍的做法，是對血清的褻玩，對科學規(guī)則的粗暴踐踏!

　　● 血清應該在-10℃以下保存。若一次無法用完一瓶，應該無菌分裝，再冷凍保存。

　　胎牛血清凍存的注意事項：

　　1. 需要長期保存的血清有必要儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%，因而，血清在凍入低溫冰箱前，有必要預留一定體積空間，不然易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

　　2. 合規(guī)生產企業(yè)供給的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾，切勿直接過濾器過濾血清。

　　3. 瓶裝血清凍結需采用逐漸凍結法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝，在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一，削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進入37℃融化，溫差大的情況下血清容易形成蛋白質凝聚而出現(xiàn)沉積和沉淀絮狀物。

　　4. 熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已凍結的血清。加熱過程中須規(guī)矩搖晃均勻。目的是使血清中的補體成分(complement)滅活，除非有必要，一般不建議做此熱處理，因為熱處理會形成血清沉積增多，而且還會影響血清的質量。補體參與反應有：滑潤肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)作化學趨化和活化。相關研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。

　　5. 切勿將血清在37℃放置太久或者反復凍融，不然血清會變得污濁，同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。

　　6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結后血清中纖維蛋白形成，這些絮狀物不會影響血清本身的質量?？煞盅b至無菌離心管400g離心去除，也可不用處理直接加入培養(yǎng)基內一起培養(yǎng)。不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

　　7. 顯微鏡下小黑點是由于經過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多，有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點，常誤認為血清受污染。

　　胎牛血清本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。